Тест на определение родства по Y-хромосоме проводится между двумя мужчинами, являющимися обязательными участниками исследования. Опциональными участниками являются еще один или несколько предполагаемых родственников мужского пола. Привлечение дополнительных участников может потребоваться в ситуации, когда необходимо установить отцовство ребенка.
В ситуации, когда предполагаемым родителем ребенка могут быть члены одной семьи (братья, отец, сын), тест на определение родства по Y-хромосоме не будет информативным. Исследование также не проводится, когда нужно установить родственную связь с персоной женского пола.